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細(xì)胞培養(yǎng)常見問(wèn)題及其解決方法
  • 發(fā)布日期:2021-01-12      瀏覽次數(shù):1312
    • 1.如何正確地保存培養(yǎng)基?
      普通的培養(yǎng)基放置在2-8℃冰箱避光保存,若已開封建議3周內(nèi)使用。未開封的培養(yǎng)基,一般可穩(wěn)定保存1年。

      2.培養(yǎng)基中酚紅的作用是什么?導(dǎo)致培養(yǎng)基顏色變化的原因有哪些?
      酚紅在培養(yǎng)基中被用來(lái)作為pH值的指示劑:中性時(shí)為紅色,酸性時(shí)為黃色,堿性時(shí)為紫色。
      培養(yǎng)基顏色變黃,原因有:培養(yǎng)基中細(xì)胞代謝產(chǎn)物為酸性,培養(yǎng)瓶受污染,細(xì)菌代謝產(chǎn)酸等導(dǎo)致。
      培養(yǎng)基顏色偏暗紅色,原因有:培養(yǎng)基保存在4℃冰箱中,培養(yǎng)基內(nèi)的二氧化碳逐漸溢出,造成培養(yǎng)基越來(lái)越偏堿性,而培養(yǎng)基中的酸堿指示劑酚紅會(huì)隨著堿性增加而更偏暗紅。

      3.培養(yǎng)基污染了,這要怎么進(jìn)行測(cè)試呢?
      取0.1ml液體培養(yǎng)基涂布到無(wú)菌蛋白棟牛肉gao培養(yǎng)基上37℃培養(yǎng)24h,觀察有無(wú)雜菌生長(zhǎng)(肉眼即可觀察到)。

      4.培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素后,可長(zhǎng)期保存嗎?
      一旦培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素,建議避光保存在4℃冰箱且在2周內(nèi)用完。因?yàn)橐恍┛股睾脱宓幕境煞衷诮鈨龊缶烷_始降解了。

      5.培養(yǎng)基有沉淀,是怎么回事?怎么預(yù)防處理沉淀?
      首先判斷培養(yǎng)基是否已經(jīng)污染,其次,若沉淀為絮狀沉淀則可能是加入血清引起的,此沉淀對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)無(wú)影響。若沉淀為結(jié)晶,有可能是因?yàn)橄蚺囵B(yǎng)基里加入的輔助試劑降低了培養(yǎng)基的溶解度,使一些無(wú)機(jī)鹽析出。
      可應(yīng)用離心、過(guò)濾的方法去除這些沉淀,盡可能地減少血清凍融次數(shù)。

      6.在什么情況下可以使用不加酚紅的培養(yǎng)基呢?
      研究表明,酚紅可以模擬固醇類激素(特別是雌激素)的作用。為避免固醇類反應(yīng),培養(yǎng)細(xì)胞時(shí),用不加酚紅的培養(yǎng)基;一些研究人員在做流式細(xì)胞檢測(cè)時(shí),為了避免酚紅干擾檢測(cè),也使用不加酚紅的培養(yǎng)基。

      7.為什么培養(yǎng)基中會(huì)含有L-谷氨酰胺和丙酮酸鈉,它們的作用是什么?
      L-谷氨酰胺脫掉氨基后可作為培養(yǎng)細(xì)胞的能量來(lái)源參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝。丙酮酸鈉可以作為細(xì)胞培養(yǎng)中的替代碳源。盡管細(xì)胞更傾向于以葡萄糖作為碳源,但是如果沒(méi)有葡萄糖的話,細(xì)胞也可以代謝丙酮酸鈉。
       

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